کلون ، بیان و بررسی خصوصیات ایمونولوژیکی پروتئین کایمر حاصل از ژن های cfab، cfae و eltb از باکتری etec

اشرشیاکلی انتروتوکسیژنیک (etec) از علل اصلی اسهال در کشورهای در حال توسعه و نیز کودکان می باشد. از مهمترین فاکتورهای حدت etec می توان انتروتوکسین و فاکتورهای چسبندگی (cfa) را نام برد. cfa/i اولین و رایج ترین فاکتور چسبندگی است. این فیمبریه دارای هزاران کپی از زیر واحد cfab و یک یا چند کپی از زیر واحد فرعی چسبنده cfae می باشد که در اتصال ارگانیسم به سلول های روده نقشی اساسی دارند. خاصیت ایمنی زایی زیرواحد b انتروتوکسین حساس به حرارت(lt) در مطالعات زیادی به اثبات رسیده است. فاکتورهای کلونیزاسیون و توکسین حساس به حرارت، مهمترین کاندیدای واکسن علیه etec می باشند. بنابراین در این مطالعه پروتئین نوترکیب متشکل از cfae، cfab و blt به عنوان کاندیدای واکسن طراحی شد. توالی ژن های این 3 پروتئین از بانکncbi استخراج و به وسیله لینکر، یک توالی کایمر تریمر ایجاد شد. توالی کد کننده با استفاده از ترجیح کدونی در e.coli طراحی شد سپس روی ناقل بیانی pet28a+ کلون شد. پس از انتقال سازه نوترکیب به میزبان اشرشیاکلی سویه bl21de3، بیان پروتئین و بهینه سازی آن انجام شد. نتایج بیان با sds-page بررسی و پروتئین نوترکیب از طریق کروماتوگرافی میل ترکیبی با کمک ستون ni-nta تخلیص شد. مطالعه ایمنی زایی پروتئین کایمر تخلیص شده در موش سوری نژاد balb/c انجام شد. برای تعیین تولید آنتی بادی igg تست الایزا با سرم موش انجام شد که نتایج نشان دهنده تولید تیتر بالای آنتی بادی بود. پیش انکوبه کردن سلولهای روده ای ht29 با سرم موش های ایمن شده، اتصال باکتری را به این سلول ها تا حد قابل توجهی کاهش داد. با توجه به نتایج به دست آمده، پروتئین کایمر نوترکیب می‏تواند به عنوان یک پروتئین ایمونوژن از اجزای مهم واکسن بر علیه etec باشد.